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复苏步骤

发表时间:2021-07-02 11:43

复苏步骤

前期准备:

1. 资料准备:查阅说明书或相关文献,了解细胞的形态(表皮样or成纤维样or圆形);明确细胞的生长特性(贴壁or悬浮);明确细胞所需完全培养基(DMEM、RPMI-1640、DMEM/F-12)

2.操作准备:

70%酒精消毒双手;超净台需提前打开紫外线照射30min;打开37℃恒温水浴锅、离心机以及倒置显微镜;紫外线照射完毕,拉起玻璃罩至灯亮,打开风循环,灯重新亮起后才能进超净台操作。

准备离心管(50ml+15ml)、移液管(5ml+10ml)、培养皿(贴壁细胞)或培养瓶(悬浮细胞、贴壁细胞均可)、枪头盒、移液枪。所有物品在进入操作台前用70%酒精消毒

配置好的细胞完全培养基(比如DMEM+10%FBS+1%Anti-Anti

2、操作步骤:

戴好手套,从液氮中取出需要解冻的冻存管(动作尽量快),将冻存管放入干冰中,快速拿到细胞培养室中。

将冻存管放入37℃恒温水浴锅中不停晃动直至解冻(冻存管管口不能接触到水浴锅里的液体,避免造成污染)。

细胞液解冻后马上擦干并用70%酒精消毒冻存管,移入超净台。取一支15ml离心管用移液管吸取5毫升细胞对应完全培养基加入离心管中(这个步骤可放在操作第一步之前),再吸取冻存管里的细胞液,放入离心管中。

将离心管放入离心机中进行离心,1500r,5分钟。

在离心机运行过程中,准备新的培养皿或培养瓶

将离心管从离心机中取出,吸掉上清液,加入对应的培养基(10cm培养皿加8ml ;6cm培养皿加4ml;25ml培养瓶贴壁细胞加5ml,悬浮细胞8ml),用移液管吹打均匀。

吹打好后将细胞液全部移入新的培养皿或培养瓶中,摇晃均匀,把培养皿(培养瓶要拧紧瓶盖)放到显微镜下观察,是否成为单个的细胞个体,最后放入37℃恒温细胞培养箱。培养瓶放入培养箱后拧松瓶盖不带滤盖的培养瓶需要这样操作

拿酒精喷洒操作台,用纸从里到外擦拭一遍,将所有东西归位,拉下玻璃罩,打开紫外线照射30min⑩拿酒精喷洒操作台,用纸从里到外擦拭一遍,将所有东西归位,拉下玻璃罩,打开紫外线照射30min;显微镜用完光照调到最小,走之前离开前关机。


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